值得收藏！動(dòng)物源性食品中甲芐喹啉和癸氧喹酯殘留量測(cè)定的前處理方法
值得收藏！動(dòng)物源性食品中甲芐喹啉和癸氧喹酯殘留量測(cè)定的前處理方法
甲芐喹啉和癸氧喹酯同屬于喹啉類抗球蟲藥物，用于預(yù)防及治療球蟲病。這類抗球蟲藥具有毒性低、耐受性好、代謝快的優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用非常廣泛。甲芐喹啉的抗球蟲效力較強(qiáng)，是癸氧喹酯的兩倍。癸氧喹酯是全球單一被日本、歐盟、美國(guó)和中國(guó)政府批準(zhǔn)使用的化學(xué)型抗球蟲藥，與目前中國(guó)允許使用的獸藥飼料添加劑無任何配伍禁忌。盡管這類抗球蟲藥物的毒性較低，但抗球蟲藥物的使用易導(dǎo)致球蟲出現(xiàn)抗藥性，并且畜牧生產(chǎn)中使用抗球蟲藥物有加大劑量的傾向。為保障動(dòng)物源性食品的安全，我國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部和國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局2019年發(fā)布的GB 31650-2019《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中獸藥最大殘留*》中明確規(guī)定了癸氧喹酯在雞靶組織中的殘留*。
本文闡述了如何將甲芐喹啉和癸氧喹酯從樣品基質(zhì)中分離提取出來，并經(jīng)過凈化后，轉(zhuǎn)化成液質(zhì)聯(lián)用儀可以檢測(cè)的形式。以提取、凈化為重點(diǎn)，依據(jù)行標(biāo)SN/T 2444-2010，為檢測(cè)人員和相關(guān)領(lǐng)域研究人員提供一定的參考。
檢測(cè)項(xiàng)目：甲芐喹啉、癸氧喹酯
應(yīng)用范圍：雞肉、雞肝、雞腎、雞蛋、牛肝和牛奶
液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法
方法原理：采用乙腈提取試樣中殘留的甲芐喹啉和癸氧喹酯，提取液經(jīng)固相萃取柱凈化，液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜檢測(cè)和確證，外標(biāo)法定量。
前處理儀器：
固相萃取裝置；氮吹濃縮儀；均質(zhì)器；旋渦混勻器；離心機(jī)（5000 r/min以上）；分析天平（感量0.1 mg和0.01 g）；移液器（10 μL～100 μL和100 μL～1000 μL）；聚丙烯離心管（50 mL和15 mL，帶螺旋蓋）；容量瓶（100 mL和1000 mL）；往復(fù)式振蕩器。
檢測(cè)儀器：LC-MS/MS+ESI源
從所取全部樣品中取出有代表性樣品可食部分約500 g，充分搗碎均勻，均分成兩份，分別裝入潔凈容器中，密封，并標(biāo)明標(biāo)記，于零下18 ℃ 以下冷凍存放。
從所取全部樣品中取出有代表性樣品約500 g，均分成兩份，分別裝入潔凈容器中，密封，并標(biāo)明標(biāo)記，于4 ℃ 冷藏存放。
制樣要求：在制樣的操作過程中，應(yīng)防止樣品污染。
稱取樣品5 g（精確至0.01 g）于50 mL具塞離心管中，加入15 mL乙腈，旋渦混勻1 min，在往復(fù)式振蕩器上振蕩提取5 min，3000 r/min離心5 min，將上清液轉(zhuǎn)移至另一50 mL離心管中。在殘?jiān)屑尤?/span>10 mL乙腈，重復(fù)提取一次，5000 r/min離心5 min，合并乙腈層。在乙腈提取液中加入過量氯化鈉，旋渦混勻1 min，5000 r/min離心3 min。取上層乙腈層5 mL于15 mL離心管中，45 ℃水浴下吹氮濃縮至3 mL，加水定容至10 mL，待凈化。
將待凈化液轉(zhuǎn)入HLB固相萃取柱（60 mg，3 mL使用前依次用5 mL甲醇和5 mL水活化），以約3 mL/min的流速使樣液全部通過固相萃取柱，棄去流出液。再分別用3 mL 30 %乙腈水溶液，3 mL水淋洗，棄去流出液，用真空泵抽干固相萃取柱15 min。用3 mL乙腈洗脫被測(cè)物于15 mL離心管中，45 ℃水浴下吹氮濃縮至近干，用樣品定容溶液（乙腈+水1+1加0.1 %甲酸）溶解并定容至1.0 mL，旋渦混勻后過0.2 μm濾膜，用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀測(cè)定。
國(guó)標(biāo)解讀及注意事項(xiàng)
1.甲芐喹啉標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用N,N-二甲基甲酰胺配成100 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，在零下18 ℃以下避光保存；癸氧喹酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用三氯（甲）甲烷配成100 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，在零下18 ℃以下避光保存。
2.本方法使用乙腈分兩次提取目標(biāo)化合物，加鹽凈化后，再使用HLB柱進(jìn)行富集凈化，相當(dāng)于1 g試料進(jìn)行上機(jī)檢測(cè)。
3.使用乙腈作為提取溶劑時(shí)，需要注意乙腈沉淀蛋白的效果很好，但是容易使肌肉樣品“抱團(tuán)”不分散，影響目標(biāo)物的提取率。所以在加入乙腈后應(yīng)立即進(jìn)行渦旋處理，使肉樣分散。
4.固相萃取過程中需要控制流速，使溶液一滴一滴地流下，以保證吸附解離的效果。
5. HLB柱淋洗后一定要充分抽干小柱中的水，防止水進(jìn)入洗脫液中，導(dǎo)致后續(xù)濃縮過程中洗脫液不能被吹干。
6.本方法使用基質(zhì)加標(biāo)流程曲線進(jìn)行定量，還可以使用癸氧喹酯相對(duì)應(yīng)的同位素內(nèi)標(biāo)配制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
SN/T 2444-2010進(jìn)出口動(dòng)物源食品中甲芐喹啉和癸氧喹酯殘留量的測(cè)定 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法
圖1雞肉、雞肝、雞腎、雞蛋、牛肝和牛奶中甲芐喹啉和癸氧喹酯殘留量測(cè)定的前處理流程圖
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